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侵袭性真菌感染指真菌侵入人体组织、血液并在其中生长繁殖引致组织损害、器官功能障碍和炎症反应的病理改变及病理生理过程。通常侵入的是人体深部组织，取材困难，病原学诊断困难，抗真菌治疗疗程长，药物价格较贵，毒性较大。
真菌感染实验室诊断有四大种：
1. 显微镜检查，看形态学；
2. 真菌培养，可以鉴定和药敏；
3. 免疫血清学试验，真菌特异性抗原和特异性抗体检测；
4. 分子生物学检测，PCR和二代测序法。
其中形态学/培养和分子生物学检测都必须采集到感染部位标本，即采集到的标本一定要有真菌，才能检测出来，所以存在采集标本的困难。而血清学试验，需要的是血液、体液（如肺泡灌洗液）标本。血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则(2017年第五次修改)，也重点推荐镜检、培养和血液抗原抗体检测的方法，目前检测血液中真菌核酸的聚合酶链反应(PCR)检测还缺乏标准化。
一、显微镜检查
方法简单：不染色直接镜检，看菌丝和孢子（如阴道的真菌病），革兰染色，荧光白染色（非常好），棉兰染色、墨汁染色（隐球菌）、六胺银染色（针对肺孢子病）等
优点：
简便、快速、价廉、可初步诊断对某些真菌感染可以确诊；
对毛霉、根霉菌的诊断非常重要；
肺孢子菌不能体外培养，镜检可比较好。
缺点：
敏感性低 (无菌体液敏感性更低) ；
合格标本取材困难；
对检验人员经验和技术有较高的要求。
二、 真菌培养（金标准方法）
方法：增菌培养，沙堡弱培养基，马铃薯培养基等
优点：
对无菌体液标本培养阳性是诊断的“金标准”；
可以进行菌种鉴定；
可以进行药敏试验。
缺点：
曲霉菌被内皮细胞吞噬后，诱导组织因子表达，抑制了在培养基中的生长，敏感性低，培养时间长；
对非无菌部位标本不能区分是感染还是定植；
血培养对曲霉菌感染诊断价值低；
合格标本取材困难。
❖ 真菌形态多种多样，很多根据形态就能鉴定，所以要有鉴定思路
临床常见真菌的形态学分类：
1. 酵母型菌落：
✦ 酵母型真菌：包括单细胞，呈圆形或椭圆形，以出芽方式繁殖(如隐球菌属）；
✦ 类酵母型真菌：单细胞，有的出芽繁殖后，芽管延长不与母细胞脱离，而形成假菌丝(如念珠菌)。
2. 丝状菌落：丝状型真菌，多细胞，呈丝状，由菌丝和孢子组成，如曲霉菌、毛霉菌等。
3. 双相菌落：双相型真菌，不同的温度条件下可以两种形式存在，25℃呈丝状，35℃呈酵母状，如马尔尼菲蓝状菌、组织胞浆菌、球孢子菌、芽生菌、孢子丝菌。
4. 非培养真菌：目前尚无培养方法， 如肺孢子菌。
❖ 医学上重要的双相真菌：组织胞浆菌，皮炎芽生菌，粗球孢子菌，副球孢子菌，马尔尼菲蓝状菌，申克孢子丝菌。
❖ 丝状菌落，根据菌丝的形态分无隔菌丝和有隔菌丝；
❖ 无隔菌丝，中间没有分隔，比较柔软，像个飘带样子；
❖ 有隔菌丝，中间有一个一个分隔，根据颜色不同又可分为暗色和透明色菌丝。
❖ 医学上重要的无隔菌丝真菌：
毛霉目--毛霉属、根霉、犁头霉（横梗霉）、小克银汉霉、总状共头霉、卷曲霉；
虫霉目--耳霉、蛙粪霉。
❖ 医学上重要的有隔菌丝真菌（暗色真菌）
菌丝和孢子的细胞壁具有黑色素样颜色的一大群真菌
着色芽生菌病：疣状瓶霉、卡氏枝孢霉
暗色丝孢霉病：链格孢霉、外瓶霉
❖ 医学上重要的有隔菌丝（透明）真菌
根据分生孢子梗末端有膨大的囊泡，囊泡上有小梗和分生孢子分为黄曲霉、黑曲霉。
分生孢子梗分支成扫帚状，如青霉菌、拟青霉、帚霉菌
分生孢子成簇或成球状，如镰刀菌、木霉、黏帚霉、头孢霉菌，尖端赛多孢菌
分生孢子单生，如金孢霉菌、黄瘤孢霉
总结：
三、基于血清学的非培养检测技术
1. 真菌筛查试验——G试验（抗原检测）
标本采集：静脉采血4-5ml。参考范围：正常值<60ng/L。
优点：
可检测念珠菌、曲霉菌和肺孢子菌等多种真菌感染；
可在1.5-2小时得出检测结果，敏感性高；
是早期检测方法，一般先于临床症状出现阳性；
可定量检测，动态观察，评估病情严重程度和治疗效果；
标本采集方便。
缺点：
不能检测隐球菌、结合菌（毛霉目和虫霉目）感染；
不能区别何种真菌感染；
影响因素较多（比如药物的影响）。
建议：样本收集与操作中注意防污染（无热源）；
对侵袭性真菌感染的高危患者，推荐一周内2次G试验连续检测。
2. 真菌筛查试验--GM试验
优点：
GM试验阳性提示患者存在侵袭性曲霉菌病(IA)；
GM试验提前了IA的诊断时间，一般先于临床症状出现阳性；
可定量检测，动态观察，评估病情严重程度和治疗效果；
标本采集方便。
缺点：
对非粒细胞缺乏的患者敏感性差；
对使用激素的患者和器官移植患者敏感性差；
对慢性曲霉病敏感性差；
影响因素较多（如药物和白蛋白等）。
建议：对于侵袭性真菌感染的高危患者，推荐一周内2次，与G试验联合检测。
3. 曲霉抗体IgG
优点：
诊断亚急性侵袭性曲霉病(SAIA)与慢性肺曲霉病(CPA)和过敏性支气管肺曲霉病（ABPA）；
针对非严重免疫抑制/非粒细胞缺乏患者(如结核，血液病)合并感染，高敏感性，重复性好；
与GM试验互补覆盖常见曲霉感染；
可区分定植与感染；
取标本方便，可用于诊断以及治疗监测。
缺点：
真菌为条件致病菌，可刺激机体产生抗体，导致产生假阳性；
免疫力低下的患者难以产生足够的抗体。
重要指南推荐：
恶性血液病和造血干细胞移植粒缺患者，感染了曲霉菌，强 烈推荐GM试验；
慢性空洞性肺曲霉病推荐IgG试验；
4. 念珠菌抗原及抗体（临床应用不多）
优点：
念珠菌甘露聚糖抗原为念珠菌特异性抗原成分，对血清抗原的检测可以实现念珠菌病的早期诊断(早干血培养阳性67天)；
抗原、抗体联合检测，可敏感性显著高干单项检测(83%Vs30%)；
取标本方便，可用于诊断以及治疗监测。
缺点：甘露聚糖抗原稳定性相对较差，容易降解，也可被抗体中和。
5. 隐球菌荚膜多糖抗原检测
优点：
可以实现隐球菌感染（肺炎、脑膜炎）的早期诊断；
试验方法简单，敏感性和特异性高(>90%)，滴度高低提示疾病的严重程度；
取标本方便，可用于检测血液、脑脊液及肺泡灌洗液。
缺点：
试剂价格较贵；
治疗成功后抗原仍然阳性，故不能作为治疗有效的指标。
讲 者丨马筱玲（中国科技大学附属第一医院）
整理者丨胡秀琼（安徽省芜湖市第二人民医院）
审 核丨王莉（武汉大学人民医院）
本文转发自SIFIC感染科普笔记
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