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本期作者：深圳市第三人民医院 曾丽娇
审校：深圳市第三人民医院 袁静
阅读要点
1. G试验和GM试验定义及检测意义。
2. G试验和GM试验的干扰因素。
3. 隐球菌荚膜抗原的应用和受限因素。
真菌感染检测方法主要包括真菌直接镜检、真菌培养和鉴定、真菌血清学检查、分子生物学检测和组织病理学检查。本文主要介绍三个辅助真菌病早期诊断的感染指标，真菌血清学检查中的G试验、GM试验和隐球菌荚膜抗原（免疫层析法），希望能在临床实践中有所帮助。
G试验
1-3‑β‑D葡聚糖（BDG）广泛存在于真菌细胞壁中，侵袭性真菌病发生时，血液中1-3‑β‑D葡聚糖可以升高。BDG能激活鲎变形细胞溶解物中的G因子，从而旁路活化凝固酶原生成凝固酶，发生凝集反应。采用光度法对1-3-β-D-葡聚糖浓度进行定量检测，即G试验。
BDG在念珠菌、曲霉、镰刀菌、毛孢子菌、枝顶孢霉、暗色真菌、肺孢子菌等感染时都可升高，其作为广谱诊断标记，是真菌感染的一个重要参考指标，但不能区分真菌种属。目前认为，G试验阴性，对于排除侵袭性真菌病的意义更大。G试验的特异性随着检测结果数值的升高而升高，动态监测G试验对于疗效判断也有重要意义。为了尽量减少假阴性和假阳性，推荐动态连续监测，可每周检测1~2次。
01
检验结果的解释
（不同试剂判定标准不同，以试剂说明书为准）
1）60 pg/ml以下，无深部真菌感染（隐球菌、接合菌除外）；
2）60~100 pg/ml之间，为观察期，应连续检测；
3）100 pg/ml以上，怀疑为深部真菌感染，建议临床结合症状治疗。
02
假阳性和假阴性
假阳性见于：
1）应用纤维素膜进行血液透析患者；
2）某些纱布或其他医疗物品中含有葡聚糖；
3）静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白、脂肪乳等）含有葡聚糖；
4）某些细菌败血症病患者（尤其是链球菌败血症）；
5）抗肿瘤类药物（香菇多糖、裂殖菌多糖）；
6）磺胺类药物、β‑内酰胺类抗生素；
7）蘑菇类食物；
8）念珠菌定植；
9）采血管污染或过度操作；
10）溶血样本。
假阴性见于：
1）隐球菌和接合菌感染：隐球菌细胞壁形成厚荚膜，对血清的BDG贡献很小；接合菌，如毛霉、根霉等几乎不产生BDG；
2）局灶性真菌感染；
3）抗真菌药物的应用；
4）脂血和黄疸样本。
GM试验
半乳甘露聚糖（galactomannan,GM）是存在于曲霉细胞壁上的特异性多糖抗原。GM试验是体外定量检测人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖的含量的检测方法，临床上主要用于辅助侵袭性曲霉病的早期诊断，具有较高的特异性。该检测适用于血浆、血清、支气管肺泡灌洗液或脑脊液样本。
欧洲癌症研究和治疗组织（EORTC）和美国真菌病研究组（MSG）2020年诊断指南中建议单次血清或血浆GM值≥1.0；或BALF的GM值≥1.0；或单次血清或血浆GM值≥0.7并且BALF的GM值≥0.8；脑脊液GM值≥1.0可作为侵袭性曲霉病的阳性诊断标准。连续2次以上动态监测出现GM阳性的诊断提示意义更大。
01
检验结果的解释
（不同试剂判定标准不同，以试剂说明书为准）
1）半乳甘露聚糖浓度≥0.5 μg/L，则认为半乳甘露聚糖阳性，发生曲霉菌深部感染的风险较高；
2）半乳甘露聚糖浓度＜0.25 μg/L，则认为半乳甘露聚糖阴性，发生曲霉菌深部感染的风险较低；
3）半乳甘露聚糖浓度在0.25~0.5 μg/L之间，应结合临床情况综合评价，建议连续检测观察。
02
假阳性和假阴性
假阳性见于：
1）曲霉的半乳甘露聚糖抗原与其他真菌（马尔尼菲篮状菌、隐球菌等）的抗原成分有时会有交叉，可造成GM实验的假阳性。
3）食用曲霉污染的谷类及牛奶等。
4）样本污染。
假阴性见于：
1）曲霉GM在体液中非持续存在，应用抗真菌药物、病情较轻、抗原浓度低等情况可出现假阴性。
（严重溶血、脂血和黄疸等标本可对检测数值造成干扰，不建议检测）。
隐球菌荚膜抗原
新型隐球菌荚膜抗原的乳胶隐球菌凝集试验及酶联免疫吸附测定具有高达90%以上的特异性和敏感性，且在感染早期，就能在血清和脑脊液中检测到隐球菌荚膜抗原。中枢神经系统新型隐球菌病者，脑脊液中隐球菌荚膜抗原阳性率几乎100%，血清为75%左右（AIDS者达90%），且抗原的滴度与感染的严重性平行，还可以作为疗效的观察指标。中枢神经系统以外的新型隐球菌病，阳性率仅为25%~50%。
01
隐球菌抗原免疫层析法（CrAg lateral flow assay for cryptococcosis,CrAg LFA）
1）隐球菌荚膜多糖抗原胶体金试纸条是一种简便快速的检测试剂，利用免疫层析技术，以胶体金标记单克隆抗体，可以检测新型隐球菌的全部4种（A-D型）血清型。
2）胶体金法检测结果与乳胶凝集试验和 ELISA有很好的一致性，而且操作简单 ，设备要求低。
3）建议在诊断有症状的隐球菌性脑膜炎或非脑膜隐球菌性疾病时，血清、血浆或脑脊液中使用CrAg LFA。
4）肺隐球菌病患者的隐球菌荚膜多糖抗原不仅存在于血清中，也存在于肺泡灌洗液中，对血清检测隐球菌荚膜抗原阴性患者也可尝试检测肺泡灌洗液，提高阳性率。
02
检测的受限
1）除了血清、血浆、全血和脑脊液外，其他基质的检测性能尚未确定。
2）检测溶血血清样品时，由于条带背景颜色深，可能导致假阴性。
3）如标本受过2-巯基乙醇预处理，或标本中含有咖啡咽、抗坏血酸、两性霉素B、伊曲康唑、对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸时，检测是否受影响尚未评估。
4）高浓度隐球菌抗原所致的钩带现象能够引起假阴性，但少见。
5）有文献报告毛孢子菌可能会引起假阳性。
作者
曾丽娇 主治医师
国家感染性疾病临床医学研究中心
深圳市第三人民医院感染科
审校
袁静 主任医师
国家感染性疾病临床医学研究中心
深圳市第三人民医院感染科
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