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耀眼新星:CLDN18.2引领胃癌精准诊疗新纪元
庞钧译技师作为北京协和医院病理免疫组化特殊染色负责人,详细介绍了CLDN18.2染色操作的全流程及质量控制要点。庞老师强调,高质量的病理检测不仅依赖于先进的技术平台,更离不开严格的标本处理和标准化操作流程。以下是其讲解的核心内容:
庞老师首先指出,标本采集和固定是CLDN18.2检测成功的基础。标本离体后,细胞代谢和自溶过程会迅速启动,影响后续的抗原保存和检测效果。因此,标本离体后应尽快固定,建议在30分钟内处理,以确保固定效果。固定液需充分浸泡标本,确保固定均匀。对于大标本,固定时间需12小时以上,而小标本也需充分固定,以避免因固定不充分导致的抗原丢失或结构破坏。这一环节是确保后续检测成功的关键步骤。
随着技术的发展,脱水包埋流程已基本实现自动化,但庞老师提醒,自动化并不意味着完全无误。脱水环节的质量控制至关重要,脱水不充分可能导致切片脱片、抗原暴露不充分等问题,进而影响后续的染色效果。因此,实验室需定期对脱水包埋流程进行质控,确保程序设定妥当,避免因设备故障或操作失误导致的样本损坏。
在切片环节,庞老师建议切片厚度约为4μm。这一厚度的选择是经过长期实践验证的结果:切片过厚可能导致细胞层叠,影响病理学家对细胞结构和染色结果的准确判读;而切片过薄则可能影响标记部位的准确性,导致抗原信号丢失或背景噪声增加。合适的切片厚度不仅有助于提高染色质量,还能显著提升判读的准确性,是病理检测中不可忽视的细节。
庞老师进一步指出,染色平台和抗体的选择是影响CLDN18.2检测结果的重要因素。不同染色平台可能存在染色强度不均的问题,因此需根据所使用的平台调整染色程序,以确保染色结果的均匀性和可重复性。此外,抗体的质量和特异性也是关键。高质量的抗体能够特异性地结合CLDN18.2抗原,减少非特异性染色,从而提高检测的准确性。
庞钧译技师作为北京协和医院病理免疫组化特殊染色负责人,带来了关于CLDN18.2染色操作的详细讲解。庞老师首先强调了标本采集和固定的重要性,指出标本离体后应尽快固定,建议在30分钟内处理,以确保固定效果。固定液要充分浸泡标本,大标本固定时间需12小时以上,小标本也需充分固定。这一环节是确保后续检测成功的关键步骤。他提到,脱水包埋流程已基本自动化,但需定期质控,确保程序设定妥当。脱水不充分可能导致脱片等问题,影响后续的染色效果,因此脱水环节的质量控制至关重要。在切片环节,庞老师建议切片厚度约4μm,过厚可能导致细胞层叠,影响判读;过薄可能影响标记部位的准确性。合适的切片厚度有助于提高染色质量和判读的准确性。
接着,庞老师介绍了染色平台和抗体的选择,不同平台可能染色强度不均,需根据平台调整染色程序。此外,他强调了阳性对照和阴性对照的重要性,建议使用正常胃黏膜上皮作为内对照,以验证染色成功。染色过程中需注意一抗孵育的时间和温度。染色过程中需仔细观察,确保染色结果的准确性和可靠性。
最后,庞老师分析了染色失败的常见原因,指出前期组织处理、固定、脱水等环节是导致检测结果失败的主要原因。人为因素在固定和脱水环节影响较大,需制定标准化操作流程,以减少因操作不当导致的染色失败。
在正常组织中,CLDN18.2主要见于胃上皮,且CLDN18.2的抗原表位通常隐藏在细胞内,不易形成抗原抗体的结合。在胃癌组织中,CLDN18.2的表达不仅保留,而且由于细胞间紧密连接结构的破坏,CLDN18.2的抗原表位暴露在细胞外,使其成为特定的治疗靶点。CLDN18.2在肿瘤中的表达存在一定的异质性,即在同一肿瘤的不同区域可能有不同的表达水平。这种异质性对于生物标志物的检测和评估具有重要意义,因为它可能影响治疗效果和预后。而且CLDN18.2在不同胃癌分型中的表达率不同,特别是在弥漫型胃癌中的阳性率更高。有研究表明,在胃癌原发灶及转移灶中CLDN18.2表达具有较高的一致性,原发灶和转移灶均可用于CLDN18.2的评估。
总体而言,CLDN18.2作为胃癌的一个重要生物标志物,在实际应用中,除了统一检测标准,还要考虑肿瘤异质性问题。为了准确评估CLDN18.2的表达,可能需要多个活检样本以捕捉肿瘤内部的异质性,从而提高检测的准确性。
规范操作:从取样到染色的全流程优化
黄小征教授详细介绍了肿瘤生物标志物的染色技术,特别是CLDN18.2的免疫组化检测。他强调了标准化实验流程的重要性,包括标本采集、固定、脱水、包埋和切片等步骤,为病理医生在实际工作中提高肿瘤生物标志物检测的准确性和可靠性提供了宝贵的指导和参考。
原因:脱水或固定不充分可能导致组织结构松散,增加非特异性着色的风险。
解决策略:定期更换脱水机试剂,确保固定液充足且固定时间适宜。
原因:切片过厚或过薄可能导致染色不均匀或抗原丢失。
解决策略:严格控制切片厚度(3~4微米),并使用质量优质的载玻片。
原因:染色设备故障或试剂过期可能导致试剂滴加不充分,影响染色效果。
解决策略:定期维护染色设备,确保试剂在有效期内,并选用阳离子片以减少抗原丢失。
标本采集与处理是染色技术的基础环节。黄教授指出,多点取材是提高检测准确性的关键,活检标本建议取6~8块,原发灶与转移灶均可用于CLDN18.2的检测。在固定环节,黄教授详细介绍了中性福尔马林固定液的使用要点,强调固定液与标本体积比应达到4:1,最佳为10:1,固定时间不少于6小时,不超过24或36小时,以避免组织过度固定或固定不足,从而影响后续的染色效果和检测的准确性。在切片制作环节,切片厚度的精准控制至关重要,3~4微米的厚度既能保证组织结构的完整性,又便于后续的染色和显微镜观察。推荐使用质量优质且亲水性好的载玻片,以减少抗原的丢失,确保染色的均匀性。此外,黄教授还讲述了切片保存与检测时间的注意事项,建议在切边未染色状态下45天内完成检测,但为了最大程度地保留抗原,应尽量做到当天染色。
在染色技术方面,黄教授详细介绍了自动化染色设备的使用优势,也强调了检测试剂与系统的匹配性,以确保染色结果的可靠性和可重复性。在染色过程中,对照组的设置也需关注一些细节,一般用正常的肠化生胃组织标本进行阳性对照,不建议使用正常的扁桃体作为阴性对照。同时,黄教授详细分析了一些常见染色问题的预防与解决方案,如组织处理不充分导致的非特异性着色、切片质量问题以及自动化染色中试剂滴加不充分等问题,并提供了相应的解决策略,如定期更换脱水机试剂、选用阳离子片、定期维护染色设备等。
慧眼识图:切片判读的实战技巧与精解
孙宇教授结合具体的实例分享了CLDN18.2的染色评估,进一步加深了参会者对切片判读要点和答案解析的理解。
在判读标准方面,孙教授详细介绍了肿瘤细胞的染色强度和百分比的评估方法。判读时要关注肿瘤细胞的膜染色强度,区分弱、中等、强阳性,并以75%的存活肿瘤细胞显示中等至强膜染色作为阳性标准。判读过程中,首先确定分子(肿瘤细胞)和分母(总细胞数),然后从低倍镜下观察整体染色情况,逐步放大至高倍镜下仔细评估肿瘤细胞的染色强度和分布。
孙教授特别强调了在判读过程中识别存活的侵袭性肿瘤细胞的重要性。只有存活的侵袭性肿瘤细胞才应纳入评分的分子,而非侵袭性的异型增生、坏死碎片以及非肿瘤细胞(如淋巴细胞)等均不应计入。孙教授通过对比HE染色和免疫组化结果,展示了如何准确区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞,确保判读的准确性。
在染色模式方面,孙教授描述了不同的染色表现,如环绕式、基底侧膜和顶端膜染色,并指出这些模式对判读结果的影响。她还提到了肿瘤内部的异质性问题,强调在评估时要考虑肿瘤的不同区域可能存在的染色差异,以及如何通过多点取材和综合分析来克服异质性带来的挑战。
在切片判读中也可能遇到一些其他挑战,如粘液和淋巴细胞的干扰、染色不均等问题,并提供了一些实用的解决策略。孙教授提醒参会者在判读时要仔细观察、反复对比,并结合临床信息进行综合分析,以提高判读的准确性和一致性。
庞教授对会议进行了总结,他对两位教授的精彩讲座表示感谢,并强调了会议内容的丰富性和实用性。盛教授指出,胃癌是我国的常见肿瘤,全球约三分之一的新发病例出现在我国。尽管近年来胃癌的治疗效果有所提高,但其总体生存率仍有待进一步提升。CLDN18.2作为一个新兴的靶点,其检测已被纳入最新的胃癌指南中,这也预示着病理医师将更多地参与新靶点检测的工作,因此我们需要建立相应的标准化操作流程,同时加强规范化培训,从而为临床提供更精准的诊断和治疗依据。
随着CLDN18.2靶向治疗药物——佐妥昔单抗在我国获批上市,CLDN18.2检测的重要性愈发凸显,这将为更多患者带来新的希望和治疗机会。
2024-2025肿瘤病理诊断
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(本文由黄小征教授、庞钧译教授审阅)
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