李江 北京大学第一医院消化内科主管技师

多年来一直从事幽门螺杆菌临床检测工作，此外还致力于幽门螺杆菌培养、药敏试验及其菌株库构建工作

众所周知，幽门螺杆菌（Hp）是导致胃炎、胃及十二指肠溃疡和胃癌的极其重要的因素之一，随着Hp的诊断及治疗日趋成熟，它也逐渐被广大患者所熟知，人们对于“幽门螺杆菌”这个名词的认知程度也越来越高，很多患者一出现胃部不适，自然就会想到它，同时也越来越想知道自己的不适是不是Hp引起的，急切地寻求有效的方法来证实，那么究竟什么方法能更加快捷而有效地对Hp进行诊断呢？

目前Hp的检查和诊断方法有很多种，可以分为侵入性和非侵入检测方法。侵入性检测包括快速尿素酶试验、组织学检测、细菌培养、分子生物学检测等；非侵入性检测包括尿素呼气试验、粪便抗原检测和血清学检测等，可根据基本检测来选择是否需要内镜检查。根据检测原理大致可以分为微生物学方法、免疫学方法、尿素酶依赖技术、形态学方法、分子生物学方法及生物芯片技术等。每种检测方法都是根据Hp的各种特性建立起来的，取材不同，角度不同，灵敏度及特异度也不同，不同的方法都有自己的优缺点，以下将对于目前临床上常用的诊断方法，进行简单的介绍。

微生物学方法，即幽门螺杆菌培养技术，是将取材于胃黏膜的组织研磨涂于分离培养基，进行Hp分离培养，以鉴定其存在与否，如果Hp分离培养出菌落，即可100%判定患者为Hp感染。但是，因培养条件及取材部位所限，未培养出Hp菌落的假阴性情况会同时存在。此外，此诊断方法技术及培养条件要求比较苛刻，不易普及，但此方法可以通过将培养出的Hp继续进行扩增，进行药物敏感试验，以此判定其耐药性，进而指导临床治疗。目前，能够开展此诊断方法的医疗机构不多。

免疫学方法是目前应用比较广泛、取材及诊断手段比较简单快捷的方法之一，取材来源可以是血清、粪便及尿液等。最常用的是血清学方法，目前比较方便快捷的是间接固相免疫层析法，当测试样本从样本孔向上迁移时，固定在膜上的幽门螺杆菌抗原先与测试样本中的抗体形成抗原-抗体复合物，接着抗原-抗体复合物与胶体金标记的抗人IgG结合物结合而被检出，具体方法如下图：

幽门螺杆菌的菌体表面存在多种抗原组分，如尿素酶等，该诊断方法是利用其体液免疫所产生的IgG和IgM的检测，来实现对于Hp的诊断，其中IgG在外周血中存在的时间较长，可判定既往感染的情况，而IgM则反映了感染急性期的改变，在血液中存在的时间较短，基本可以代表现症感染。两种抗体反应均为非保护性抗体，因Hp根除后，血清中抗体虽会下降，但仍可以维持在阳性状态一段时间，甚至多年之久，故该检查不建议用于对药物治疗效果的判断。但也有其优点，除了快捷简便之外，可以无需空腹，也可以不受药物对于Hp检测的干扰，可以用于临床或流行病学的筛查，也可作为¹³C尿素呼气试验的有力补充，当临床怀疑Hp感染，而呼气检测结果阴性时，可以采用血清学检测方法辅助诊断。

幽门螺杆菌粪便抗原检测也是目前比较常用的免疫学方法，由于Hp定植于胃上皮细胞表面，随着胃黏膜上皮的快速更新脱落，幽门螺杆菌也随之脱落，并通过胃肠道从粪便排出，故可以对其抗原进行准确的检测。目前最常用的也是免疫层析法，具体方法与血清抗体基本一致，只是取材对象是粪便，对其抗原进行检测。因为检测的是抗原，因此可以反映现症感染情况，并可以用于治疗后复查，判定疗效。但由于抗生素、抑酸药物可导致Hp受到抑制，可能会出现假阴性的结果，故须停服上述药物一个月以上方可进行准确检测。此外粪便标本的质地，稀释的混匀程度等都可影响其准确性。该检测可以用于大规模流行病学调查，对于不方便进行现场检测和不易配合尿素呼气试验检测的老人和儿童，此检测比较适合。

尿素酶依赖技术是现今最为常用的诊断手段，包括快速尿素酶试验和¹³C/¹⁴C-尿素呼气试验，由于Hp有着产生特征性酶——尿素酶的特性，所以通过尿素酶来检测Hp的检测是准确而可靠的。

快速尿素酶检测是其中方法最为简便，出结果最快的方法，尿素酶可以分解尿素为氨和二氧化碳，其pH值会使其菌体所在区域呈弱碱性（pH＞8.4），目前尿素酶试剂（含有尿素、酚红指示剂、缓冲液等）在酸性条件下（pH＜6.8）,酚红呈橘黄色，将Hp感染区域的组织放入试剂中，由于pH由酸性变为弱碱性，试剂则变为紫红色，由此来判定是否有Hp的感染。此检测须在患者进行胃镜检查时同时进行。由于放入的活检组织本身会引起试剂pH出现波动，导致pH可能升高，而出现假阳性结果。此外，Hp在胃内分布不均，Hp感染阳性的患者取材部位如无或仅有少量Hp生长，可导致假阴性的结果。此外，标本的大小、反应时间、环境温度以及试剂质量不稳定等因素，都可影响检测结果的准确性。

目前最为普遍使用的，并且准确性最高的尿素酶依赖技术，就是¹³C/¹⁴C尿素呼气试验了，堪称Hp非侵入性诊断的“金标准”。该检测以准确性高、操作简便等优点，现被广大医疗机构所采用。检测原理如图所示：

由于幽门螺杆菌具有内源性、特异性的尿素酶，尿素酶可将所服用的尿素（CH₄N₂O）分解为NH₃和CO₂, 而CO₂在小肠上端吸收后进入血液循环并随呼气排出，让受检查者口服¹³C/¹⁴C标记的尿素(¹³CH₄N₂O)后，如果胃内存在幽门螺杆菌的感染，就可以将¹³C/¹⁴C标记的尿素分解为¹³C/¹⁴C标记的CO_2，因此，通过探测呼气中的¹³C/¹⁴C标记的CO₂，即可诊断幽门螺杆菌的感染，由于口服的¹³C/¹⁴C标记的尿素到达胃内呈均匀分布，只要在¹³C/¹⁴C标记的尿素接触的部位存在幽门螺杆菌感染，就可以敏感的检测到。

检测方法如图所示：

对于¹³C/¹⁴C-尿素呼气试验，需要注意的是，检测前，患者须停用抗生素和铋剂一个月以上，抑酸药停药两周以上，有些清热解毒的中药可能对于幽门螺杆菌具有抑制作用，但用量和时间尚无定论。患者须空腹两小时以上，两小时内有少量的饮水（白水或矿泉水）可以忽略。由于除上述药物以外的其他药物及一些食物（如乳酸菌）也可能在某种程度上对检测结果造成或多或少的影响，一般可以与幽门螺杆菌抗体检测或者幽门螺杆菌粪便抗原检测同时进行，以确定患者是否真的感染了Hp。对于抗生素等药物治疗予以更加准确的指导。

幽门螺杆菌形态学诊断，比较常用的是Warthin-Starry银染色、苏木精-伊红染色、免疫组织化学方法等，虽然检测到Hp即可准确判定其存在，但是由于部位局限性和漏检的可能性，有可能出现假阴性结果，此外，检测技术要求比较高、烦琐、诊断时长较长等原因，使其未在各大医疗机构普及。

Hp诊断的分子生物学技术是将胃镜活检的胃黏膜组织，提取DNA进行多聚酶链式反应（PCR）和探针杂交技术诊断Hp，具有准确性高，检测灵敏度高的优点，还可以特异性地检测幽门螺杆菌毒素，如毒素相关蛋白（VacA）和空泡细胞毒素（CagA）。但操作复杂，易污染，目前多用于科学研究。

随着幽门螺杆菌研究的不断发展，生物芯片技术逐渐应用于Hp领域。其中基因芯片技术由于其较高的灵敏性、特异性和客观性越来越多地用于Hp的诊断。该技术操作快速简便，有望成为Hp诊断的权威方法和金标准。此外，基因芯片技术对于日渐严重的Hp的耐药问题具有很大的帮助，它对于Hp的耐药型能够进行非常快捷而准确的分析，对临床治疗具有重要的指导意义，未来可能成为诊断Hp耐药型的基础方法。

随着Hp诊断治疗的不断深入，幽门螺杆菌也被细分为Ⅰ型毒株（含有CagA和VacA基因并表达两种蛋白）和Ⅱ型无毒株，以实现精准诊断精准治疗。对患者感染的幽门螺杆菌毒株进行鉴定，可以为临床医生开展选择性治疗提供重要的实验诊断依据，把握最佳治疗效果，避免药物的毒副反应。目前广泛应用的是免疫印迹方法，已被广大医疗机构应用于临床。

目前，幽门螺杆菌的各种诊断方法已经相当成熟，其发展方向也都本着方便、快捷、准确并且无创的宗旨，相信随着科学技术的发展，Hp的诊断技术也会得到日新月异的发展。

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