作者：徐启桓教授  中山大学附属第三医院

       我国是慢性乙型病毒性肝炎发病大国，慢乙肝患者易于进展为肝硬化、肝癌，严重影响着人民的身心健康。但慢乙肝的发病机制迄今为止尚未完全明确。目前的研究认为HBV感染诱导机体免疫应答引起的病理损伤是引起慢性HBV感染肝损伤的主要原因。Interleukin-32(IL-32，白细胞介素32)是一种促炎症细胞因子，研究发现IL-32可以诱导IL-6、TNF-α、IL-8、MIP-2等细胞因子的表达。最新的研究发现HBV及HBV编码的蛋白可诱导肝细胞IL-32表达增高，慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中IL-32表达增高，证实HBV感染导致机体外周血中IL-32表达水平发生变化，认为IL-32可能参与了慢性HBV感染者肝组织损伤及病情发展。

       针对慢乙肝可能的发病机制，目前公认抗病毒治疗在控制慢乙肝的病情进展中起重要作用。用于抗病毒的药物主要是两类：核苷(酸)类似物(Nucleoside analogues，NA)，干扰素(IFN)。因此，本研究通过检测接受不同治疗方案的慢乙肝患者血清中IL-32的水平，探讨药物对IL-32表达的影响，以期为治疗慢性HBV感染提供新的依据和思路。

1 材料与方法

1．1 一般资料 我院接受抗病毒治疗的HBeAg阳性的慢乙肝患者180例，随机分为两组：一组为核苷类似物治疗组(NA)，共92例，其中男性70例，女性22例，平均年龄(32±3．8)岁，给予拉米夫定0．1 g+阿德福韦酯10 mg口服，1次／d，疗程48周；另一组为干扰素治疗组(IFN)，共88例，其中男性68例，女性12例，平均年龄(30±5．6)岁，给予IFN-α2a皮下注射，180 U／次，1次／周，疗程48周。两组人员在性别、年龄上比较，差异无统计学意义(P>0．05)。慢乙肝诊断标准参照2000年全国病毒性肝炎学术会议修订标准。

1．2 标本收集 于晨起采空腹肘静脉血10 ml于非抗凝干燥无菌真空管中，室温静止60 min自行凝固，再以1500 r／min离心10 min，取上清液装于EP管内，置-80度冰箱保存。分别收集抗病毒治疗前及治疗后12周、24周、48周的外周血标本。

1．3 检测方法 人IL-32 ELISA试剂盒购自美国GBD公司，按照说明书进行操作。

1．4 肝功能的检测 试剂购自美国Beckman公司。用13本Olympus AU2700全自动生化分析仪进行检测。检测指标包括ALT、AST、TBIL等。

1．5 统计学方法 数据分析采用用SPSS 17．0软件。两组间均数比较采用t检验。IL-32水平与ALT、AST、TBIL及HBV DNA间的相关性分析采用Pearson相关性分析。P<0．05认为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 两组患者血清生化指标、病毒载量比较 两组患者抗病毒治疗前ALT、AST、TBIL等指标差异无统计学意义，P>0．05)。见表1。

2．2 抗病毒治疗期间ALT复常率、HBeAg转阴率、HBV DNA转阴率 核苷类药物抗病毒治疗24周、48周时的ALT复常率分别是50％、95％，IFN抗病毒治疗24周、48周时的ALT复常率分别是22％、77％，两组之间的差异有统计学意义，核苷类药物组高于干扰素组(P<0．05)。抗病毒治疗48周时两组之间的HBeAg转阴率有差异(IFN组32％，核苷类药物组28％)，但差异无统计学意义(P>0．05)。抗病毒治疗48周时两组之问的HBV DNA转阴率有差异，核苷类药物治疗组(67％)高于干扰素治疗组(54％)，且两组之问的差异有统计学意义(P<0．05)。

2．3 两组患者血清中IL-32表达水平的比较 两组人员抗病毒治疗前血清中IL-32表达水平差异无统计学意义(P>0．05)。抗病毒治疗后两组患者的血清IL-32均有下降，直到48周时两组间IL-32的下降水平仍差异无统计学意义(P>0．05)，但与抗病毒治疗前血清IL-32相比有明显差异(P<0．05)(图1)。

2．4 慢乙肝患者血清中IL-32表达水平与外周血中ALT、AST、TBIL、HBV DNA定量的相关性分析 对所有患者标本的检测结果进行双变量相关性分析，结果显示：血清中IL-32水平与ALT(r=0．48，P=0．033)、AST(r=0．56，P=0．015)、HBV DNA(r=0．45，P=0．045)呈正相关，与TBIL(r=0．078，P=0．372)无显著相关性。

 3 讨论

      核苷类药物与干扰素属于目前用于抗HBV的两类主要药物，此两类药物的作用机制不同。核苷类药物以HBV DNA聚合酶为靶点，抑制HBV复制。干扰素是通过调节免疫发挥作用，可诱导IL-2、TNF-α等多种细胞因子表达水平的变化而达到抗病毒的目的。Xu等研究证实慢乙肝患者肝组织中IL-32表达增高，且证实干扰素抗病毒治疗48周后肝组织中IL-32水平较抗病毒治疗前明显下降，肝组织炎症减轻。庄桂龙等研究发现乙肝相关性肝衰竭患者血清中IL-32表达增高，与炎症程度相关，认为IL-32可能参与乙肝相关性肝衰竭的发病。本课题研究证实慢乙肝患者外周血中IL-32表达增高，这与许春梅等研究结果一致，进一步证实了IL-32在HBV引起的肝疾病中的作用。

      本研究亦发现慢乙肝患者抗病毒治疗后血清IL-32表达逐渐降低，且IL-32表达水平与ALT、AST水平呈正相关。据此我们推测促炎症细胞因子IL-32可能在慢乙肝的发病中起重要的作用。Pan等最近报道HBV及其编码蛋白HBx诱导肝细胞表达IL-32，本研究发现慢乙肝患者抗病毒治疗前IL-32明显增高，抗病毒治疗后IL-32表达水平逐渐下降，可能是HBV复制减少，HBV及其编码的HBx蛋白逐渐降低，诱导IL-32表达的水平下降。此研究结果进一步证实HBV感染后诱导IL-32表达增高，IL-32与慢乙肝发病密切相关。

       两组患者抗病毒治疗后血清IL-32表达均有下降，但两组之间的IL-32下降水平并无显著性差异，这可能与HBV可诱导IL-32表达，而抑制病毒复制后，IL-32表达下降有关。邹敏等研究发现使用干扰素的慢乙肝患者血清IL-21表达增高，而使用核苷类药物的慢乙肝患者血清IL-21表达下降，推测可能与干扰素的免疫调节机制有关。接下来，我们将扩大样本，进一步分析使用不同抗病毒药物后IL-32 mRNA的表达变化，以进一步探讨IL-32对机体的调节作用。本研究亦发现核苷类药物组患者ALT复常率、HBV DNA转阴率均高于干扰素组患者，这可能与干扰素使用后可引起部分患者ALT升高及样本量较小、观察疗程有限等因素有关，我们将扩大样本量、延长随访时间等继续观察两类药物在慢乙肝治疗中的利弊。