1.2.2 疾病活动度评分 根据系统性红斑狼疮疾病活动性指数量表进行系统性红斑狼疮活动度评分，疾病缓解为 0～9 分，疾病活动为≥10 分。 1.2.3 血液采集 采集所有研究对象空腹外周血 4 ml 于抗凝管中，在采集的外周血中加入适量的淋巴细胞分离液，离心，取上层液面和中层液面之间的乳白色单个核细胞层；采用 Trizol 法提取外周血单个核细胞的总 RNA，根据 260 nm 吸光度计算 RNA 含量，采用紫外分光光度计检测提取的单个核细胞总 RNA 的纯度；根据 RNA 逆转录合成 cDNA；配制 PCR 的总反应体系为 20 μl，空白对照组加入 20 μl 超纯水，RTQ-PCR 检测 FAS/FASLG 及内参基因 GAPDH 的扩增情况；数据分析时，FAS/FASLG 基因的相对定量用 2-△Ct 表示，△Ct 为检测基因的平均 Ct 值 - 内参基因的平均 Ct 值。 1.3 主要观察指标观察各组 FAS 和 FASLG mRNA 的表达，以及 FAS 和 FASLG mRNA 的表达与系统性红斑狼疮患者临床特点的关系。 1.4 统计学方法数据分析采用 SPSS 20.0 统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，非正态分布以 M（P25，P75）描述，正态分布用 t 检验，非正态分布用Mann-whitney 秩和检验，P <0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 提取的外周血白细胞总 RNA 用紫外分光光度计检测提取的外周血白细胞总 RNA 吸光度值，发现 A260/A280 在 1.8～2.0，RNA 经琼脂糖凝胶电泳后见 2 条清晰条带，亮度和宽度基本符合 2︰1 的比例，RNA 没有明显降解，比较完整。见图 1。 2.2 各组的 FAS mRNA 表达外周血白细胞中，系统性红斑狼疮组患者 FAS mRNA 相对表达量为 0.0182（0.0002~0.1879），对照组 FAS mRNA 相对表达量为 0.0089（0.0003-0.0874），经 Mann-whitney 秩和检验，两组差异有统计学意义（Z =4.012，P =0.009），系统性红斑狼疮组 FAS mRNA 相对表达量高于对照组；活动期系统性红斑狼疮组 FAS mRNA 相对表达量为0.0297（0.0062~0.1154），非活动期系统性红斑狼疮组 FAS mRNA 相对表达量为 0.0131（0.0003~0.0427），经 mann-whitney 秩和检验，两组差异有统计学意义（Z =3.276，P =0.043），活动期系统性红斑狼疮组 FAS mRNA 相对表达量高于非活动期系统性红斑狼疮组（见图 2）。表明外周血白细胞 FAS mRNA 表达量与系统性红斑狼疮及其严重程度相关。

2.3 各组的 FASLG mRNA 表达外周血白细胞中，系统性红斑狼疮组患者 FASLG mRNA 相对表达量为 0.0019（0.0001~0.0786），对照组 FASLG mRNA 相对表达量为 0.0017（0.003~0.0168），经 Mann-whitney 秩和检验，两组差异无统计学意义（Z =1.201，P =0.342）；活动期系统性红斑狼疮组 FASLG mRNA 相对表达量为 0.0020（0.0003-0.0775），非活动期系统性红斑狼疮组 FASLG mRNA 相对表达量为 0.0013（0.0001~0.0425），经 Mann-whitney 秩和检验，两组差异无统计学意义（Z =0.908，P =0.795）（见图 3）。表明外周血白细胞 FASLG mRNA 表达量与系统性红斑狼疮及其严重程度无关。

2.4 系统性红斑狼疮患者外周血白细胞中 FAS mRNA 表达及与临床特点的关系外周血白细胞中，有发热和无发热患者 FAS mRNA 表达量分别为 0.0148（0.0003~0.0357）和 0.0271 （0.0061~0.1031），经 Mann-whitney 秩和检验，两组差异有统计学意义（Z =3.756，P =0.015），无发热组 FAS mRNA 表达量高于有发热组；有面部红斑和无面部红斑患者 FAS mRNA 表达量分 别为 0.0272 （0.0103~0.1078）和 0.0157（0.0005~0.0978），经 Mannwhitney 秩和检验，两组差异有统计学意义（Z =3.426， P =0.037），有面部红斑患者 FAS mRNA 表达量高于无面部红斑患者；有脱发和无脱发患者FAS mRNA 表达量分别为 0.0243 （0.0003~0.1054） 和 0.0171 （0.0047~0.1042），两组差异无统计学意义（Z =1.029， P =0.563）；有关节炎患者和无关节炎患者 FAS mRNA 表达量分别为 0.0181（0.0003~0.1052）和 0.0224 （0.0054~0.1143），两组差异无统计学意义（Z =0.968， P =0.634）；有皮疹和无皮疹患者 FAS mRNA 表达量分别为 0.0187（0.0121~0.1213）和 0.0214（0.0007~ 0.1124），两组差异无统计学意义（Z =1.215，P =0.523）（见图 4）。表明外周血白细胞中 FAS mRNA 表达与系统性红斑狼疮患者发热和面部红斑相关。

2.5 系统性红斑狼疮患者外周血白细胞中 FASLG mRNA 表达及与临床特点的关系外周血白细胞中，有发热和无发热患者 FASLG mRNA 表达量分别为 0.0012（0.0001~0.0296）和 0.0018 （0.0003~0.0374），经 Mann-whitney 秩和检验，两组差异无统计学意义（Z =1.065，P =0.512）；有面部红斑和无面部红斑患者 FASLG mRNA 表达量分别为 0.0039（0.0004~0.0323）和 0.0011（0.0002~0.0378），经 Mann-whitney 秩和检验，两组差异有统计学意义（Z =4.204，P =0.021），有面部红斑患者 FASLG mRNA 表达量高于无面部红斑患者；有脱发和无脱发患者 FASLG mRNA 表达量分别为 0.0018（0.0002~0.0231）和 0.0015（0.0001~0.0315），两组差异无统计学意义（Z =0.783，P =0.748）；有关节炎患者和无关节炎患者 FASLG mRNA 表达量分别为 0.0014（0.0002~0.0314）和0.0023（0.0006~0.0324），两组差异无统计学意义（Z =0.879，P =0.623）；有皮疹和无皮疹患者 FASLG mRNA 表达量分别为 0.0034（0.0007~0.0324）和 0.0011 （0.0001~0.0364），两组差异有统计学意义（Z =4.026， P =0.025），有皮疹患者 FASLG mRNA 表达量高于无皮疹患者（见图 5）。表明外周血白细胞中 FAS mRNA 表达与系统性红斑狼疮患者面部红斑及皮疹相关。

3 讨论系统性红斑狼疮作为一种自身免疫性疾病，其发病机制与机体内的自身免疫耐受和免疫平衡被打破有关[7-8]。细胞凋亡是指在特定信号的诱导下和特定基因的调控下，细胞发生的主动性死亡，细胞的凋亡能够清除体内生长异常的细胞及体内老化的细胞，对机体的组织稳态、免疫耐受及免疫平衡具有一定意义，FAS/FASLG 在自身免疫性疾病中介导细胞的凋亡[9-10]。FAS 属于神经生长因子和肿瘤坏死因子受体家族成员之一，具有膜受体特性，胞浆区有死亡域，死亡域在细胞凋亡过程中发挥重要作用[11]。 FAS 基因由 8 个内含子和 9 个外显子组成，位于第 10 号染色体上，其翻译的产物 sFAS 能够和 FASLG 结合，对 FAS 介导的细胞凋亡具有抑制作用。FASLG 属于肿瘤坏死因子家族成员之一，FASLG 含有 3 个内含子和 5 个外显子，位于第 1 号染色体上。在机体的病原体或者抗原被清除后，FAS 相关的凋亡清除激活的 T 细胞，在 FADD、Caspase-8 和 10 的参与下，FAS 引起死亡诱导信号复合物聚集，诱导细胞的凋亡。FAS 介导的细胞凋亡参与机体免疫调节，维持机体内环境的稳定，机体内淋巴细胞过度活化和细胞凋亡的异常产生大量自身抗体及免疫复合物，引起组织损伤[12-13]。在系统性红斑狼疮患者体内，FAS 介导的细胞凋亡紊乱，T 淋巴细胞凋亡增加，外周血 B 细胞和 T 细胞 FAS 蛋白表达增加；系统性红斑狼疮患者淋巴细胞过度活化，FAS 参与的淋巴细胞的凋亡功能亢进，细胞凋亡产生的抗原在机体免疫系统中引起自身抗体的产生，使免疫耐受被打破[14]。关于 FAS/FASLG 和系统性红斑狼疮关系的研究主要集中在血清 FAS/ FASLG 表达和 FAS/FASLG 抗原蛋白水平[15]，关于 FAS/FASLG mRNA 和系统性红斑狼疮关系的研究比较少，WU 等[16]发现 FAS mRNA 可能参与系统性红斑狼疮的发病过程。本研究笔者在基因转录水平探讨系统性红斑狼疮患者 FAS 和 FASLG mRNA 的表达，并分析其与系统性红斑狼疮临床特征的关系，发现系统性红斑狼疮组 FAS mRNA 相对表达量高于对照组，活动期系统性红斑狼疮组FAS mRNA 相对表达量高于非活动期系统性红斑狼疮组。FASLG mRNA 相对表达量在各组间比较差异无统计学意义。系统性红斑狼疮有发热和无发热者 FAS mRNA 表达差异有统计学意义；有面部红斑和无面部红斑者 FAS mRNA 和 FASLG mRNA 表达差异有统计学意义；有皮疹和无皮疹者 FASLG mRNA 表达差异有统计学意义。本研究结果表明，系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞中 FAS mRNA 水平升高，且与疾病活动期有关，系统性红斑狼疮患者的部分临床特点和 FAS 和 FASLG mRNA 的表达有关。FAS 和 FASLG 结合后，通过调节肿瘤坏死因子相关因子的相互作用激活 NF-κB 通路和细胞外信号调节激酶，引起炎症反应的发生，同时能够释放大量炎症细胞因子，诱导FAS 在细胞上表达升高，因此 FAS/FASLG 与系统性红斑狼疮患者的部分临床特点相关可能和上述机制有关。

参 考 文 献： 

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