探讨微小核糖核酸-21(miR-21)靶向蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)/磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)通路对人胆管癌细胞株QBC939恶性生物学行为的影响。
将对数期生长的胆管癌细胞株QBC939分为4组: 空载组、空白对照组、过表达组、沉默组。倒置荧光显微镜检测转染效率; 四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪、Transwell小室实验、划痕实验检测细胞增殖活性、凋亡率、侵袭活性和迁移活性。实时逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-21、PTEN、PI3K、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) mRNA的表达; 免疫印迹法检测PTEN、PI3K、Akt、磷酸化Akt (p-Akt)和mTOR蛋白表达; 双荧光素酶报告基因实验验证miR-21对PTEN的作用。计量资料多组间比较采用单因素方差分析, 进一步两两差异比较采用SNK-q检验。
过表达组、沉默组、空载组转染效率分别为(90.27±18.03)%、(91.43±18.26)%和(92.16±18.41)%。与空白对照组和空载组比较, 过表达组QBC939细胞增殖活性明显提高(P值均 < 0.05), 凋亡率显著下降(P值均 < 0.01);与空白对照组、空载组和过表达组比较, 沉默组细胞增殖活性显著降低(P值均 < 0.01), 而凋亡率显著上升(P值均 < 0.01)。与空白对照组和空载组比较, 过表达组QBC939细胞迁移率和穿膜数目均显著增高(P值均 < 0.01);与空白对照组、空载组和过表达组比较, 沉默组迁移率和穿膜数目均显著下降(P值均 < 0.01)。与空白对照组和空载组比较, 过表达组miR-21、PI3K、Akt和mTOR mRNA表达均升高, PTEN mRNA表达下降, 差异均有统计学意义(P值均 < 0.05);与空白对照组、空载组和过表达组比较, 沉默组miR-21、PI3K、Akt和mTOR mRNA表达均下降, PTEN mRNA表达升高, 差异均有统计学意义(P值均 < 0.05)。与空白对照组和空载组比较, 过表达组PI3K、Akt、p-Akt和mTOR蛋白表达均显著升高, PTEN蛋白表达显著下降(P值均 < 0.01);与空白对照组、空载组和过表达组比较, 沉默组PI3K、Akt、p-Akt和mTOR蛋白表达均显著下降, PTEN蛋白表达显著升高(P值均 < 0.01)。miR-21可靶向调控PTEN的表达。
miR-21沉默可靶向PTEN/PI3K/Akt通路, 上调PTEN表达, 下调PI3K、Akt、mTOR表达及p-Akt水平, 抑制人胆管癌细胞株QBC939的恶性行为。
施喆, 周丽媛, 赵国栋, 等. miR-21靶向调控PTEN/PI3K/Akt通路对胆管癌细胞恶性生物学行为的影响[J]. 临床肝胆病杂志, 2022, 38(9): 2091-2098.
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