此前分享了呼吸道病毒标本采集，今天继续来看呼吸道非病毒感染标本采集的知识点吧。

呼吸道细菌感染、非典型病原体感染（支原体、衣原体）对于儿童是常见的，各类侵袭性真菌感染也常以呼吸道累及为首发表现，因此，早期病原学诊断对于诊治非常重要。根据感染部位及病原菌的特性选择合适的标本类型，不同病原体感染可表现为某一部位炎症较突出，包括鼻、鼻窦、耳、咽和喉部感染等；很多病原体常不仅侵犯呼吸道，还可引起呼吸系统和/或呼吸系统外组织器官病变，早期确定致病真凶非常重要，标本应尽量在疾病初发时或抗菌药物治疗之前采集。收集时间超过24 h未处理的标本不再适合做细菌培养。

所有标本必须收集在合适的无菌容器中；对于需要进行厌氧培养的标本需要注意保护标本中的厌氧菌免受氧气和干燥环境的杀伤，最好使用无菌注射器将标本注射到厌氧转运管中；一般痰培养不能进行厌氧菌培养，普通拭子也不宜用于厌氧菌培养。应采集足够量的标本用于细菌学检测，当送检标本体积不足时，应与实验室人员沟通，根据患儿病情选择优先检测项目。鼻窦、乳突及咽喉深部感染容易合并厌氧菌感染，厌氧菌感染的特征性表现包括：①局部有气体产生为重要指征之一；②发生在黏膜附近的感染；③深部外伤，如枪伤、人或动物咬伤后的继发感染；④分泌物有恶臭或暗红血色或在紫外光下发出红色荧光，或脓汁中有硫磺颗粒等。怀疑呼吸道侵袭性真菌感染的标本：宜同时选择10% KOH压片、真菌培养，另可进行乳酸酚棉兰染色或荧光染色等，支气管肺泡灌洗液可做真菌抗原检测（G实验、GM实验）。怀疑结核分枝杆菌感染的痰液和支气管肺泡灌洗液标本：可同时选择抗酸染色、分枝杆菌培养和分枝杆菌核酸检验。

1. 鼻咽拭子

请患者头部保持不动，去除鼻前孔中表面的分泌物，通过鼻腔轻轻、缓缓插入拭子至鼻咽部，当遇到阻力后即到达后鼻咽，停留数秒，轻轻旋转取出拭子，用于细菌学检验的拭子，插回采样装置或适宜的转运装置中。

说明：1) 不推荐鼻咽拭子做普通细菌培养，特殊细菌除外，如百日咳鲍特菌、脑膜炎奈瑟菌。2) 若怀疑百日咳鲍特菌感染，要提前通知实验室，准备特殊的转运培养基（Regan-Lowe）。条件许可时可提供接种培养基，直接床旁接种后转运至实验室。3) 鼻咽拭子不能用于检验鼻窦炎的病原菌。

2. 口咽拭子

请患者坐下，头后倾，张大嘴，去除鼻前孔中表面的分泌物，采样者用压舌板固定舌头，用涤纶或藻酸钙拭子越过舌根到咽后壁及扁桃体隐窝、侧壁等处；反复擦拭3～5次，收集黏膜细胞，轻轻取出拭子，避免触及舌头、悬垂体、口腔黏膜和唾液，拭子插回采样装置中或适宜的转运装置中。

说明：

1) 对化脓性咽炎，口咽拭子细菌培养主要用于筛查A群β-溶血链球菌；

2)当检验口咽拭子中的淋病奈瑟菌时，临床需要提前告知实验室；

3) 对于儿科患者，宜常规报告流感嗜血杆菌；

4) 一般情况下，不单独选用口咽拭子标本诊断上呼吸道细菌感染，宜与鼻咽拭子或鼻咽吸取物联合检验以提高呼吸道细菌感染的病原检出率。

5）化脓性链球菌是儿童和青少年细菌性咽炎最常见的病原体，应在给予抗生素治疗之前采集标本，因为单剂抗生素就可导致培养或快速抗原检测结果阴性。如果要进行快速抗原（RADT）检测，我们建议一次同时采集两份咽拭子标本。一份用于RADT，如果RADT阳性，则可丢弃另一份咽拭子标本；如果RADT阴性，则可用另一份标本进行标准咽拭子培养。采集标本时应用力擦拭两侧扁桃体（如患者已切除扁桃体则擦拭扁桃体窝）及咽后部。咽拭子进出口腔时应避免碰到舌及颊黏膜。采集足够的标本非常重要，咽拭子培养及RADT的敏感性都与接种量有关。

6）支原体：采集使用塑料柄的尼龙拭子、涤纶拭子、植绒拭子（可吸附更多的生物样本并达到较高的释放率）或人造棉拭子（不要采用带木柄的棉花拭子，因为后者可能含有抑制支原体生长及抑制分子反应的成分），观察患者口腔黏膜、咽喉部有无红肿、溃疡、脓性分泌物等情况，采集前让家长、患者知晓采集部位及目的，并获得其积极配合。

3. 痰液

痰液必须合格，采用痰液半定量培养方法，如有优势菌生长可考虑为致病菌。所有痰标本都会受到口咽部分泌物不同程度的污染，为减少污染菌的数量，对于能咳痰的年长儿，应向患儿解释痰和唾液的区别，指导患儿晨起清洗口腔或清水漱口3次，让患儿咳前深吸气，用力咳出呼吸道深部的痰液，尽量避免混入口腔、鼻咽分泌物。有研究表明，经过简单指导可显著增加所获取的痰液标本质量，减少工作量和成本。咳出的痰液应收集到灭菌、有盖的一次性容器，为方便标本采集，容器最好为广口。对于婴幼儿或年龄较小不会咳痰的患儿，常用鼻咽吸取物代替痰液。晨起第一次痰液对于抗酸杆菌、真菌及其他病原菌的检出是最佳的，婴幼儿由于留取晨起痰标本有一定困难，其他时间收集的标本也可被接受。标本鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野，白细胞＞25个/低倍视野，视为合格的深部痰标本。

4. 支气管肺泡灌洗液（BALF）

支气管肺泡灌洗前要先评估临床状态，严格遵循支气管镜检查的相关要求。患儿在静脉麻醉或局部麻醉后，导入支气管镜；常规检查气道形态后，在活检、刷检前进行支气管肺泡灌洗。病变局限者选择病变段灌洗，病变弥漫者选择右肺中叶或左肺上叶舌段灌洗。支气管镜顶端嵌顿在目标支气管段或亚段开口后，根据儿童年龄，经操作孔道每次将5～20 ml 37℃或室温无菌生理盐水（1 ml/kg）快速注入相应肺段，并用吸引器以100 mmHg（1 mmHg＝0.133kPa）的负压将液体抽回，如此共灌洗3～4次，总回收率≥30 %为宜。通常儿童回收量不超过10 ml，如果采集量＞10 ml，将标本离心可提高培养和涂片的阳性率。用于病原学分析的标本须用无菌容器收集，密封后送检。

呼吸道标本应在采集后1～2 h内迅速送至实验室，如果不能按时送达，则需要特殊的保存培养基或在冷藏条件下转运，而且应保证标本在24 h内接种到细菌培养基上。某些呼吸道感染的细菌如流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、百日咳鲍特菌等对周围环境特别敏感，对这些标本立即处理才能获得可靠结果。在转运培养基保存条件下，超过6h未处理标本时，会导致菌落形成单位减少。如果延迟时间更长，即使使用了转运培养基，也会导致微生物的大量丢失。在转运培养基中超过6h未处理的标本，冷藏能提高细菌存活，但流感嗜血杆菌、肺炎链球菌等对于低温环境很敏感，标本低温保存后接种可能造成漏检。采集的标本应置于防漏、有盖并标有患儿基本信息及检测码的无菌容器内。特殊情况可用注射器运送，但严禁将针头暴露，应用无菌塞子堵住，放在密封、防漏的塑料袋中，装入运送箱中运送。

作者：王方明、刘冰

本文首发自BCH儿童感染