抗酸染色涂片检查

抗酸染色涂片检查是当前结核菌实验室检查最基本、最普及的方法之一，其基本原理是分枝杆菌细胞壁内含大量脂质，一般不易着色，但分枝杆菌产生的分枝杆菌酸与染料结合后很难被酸性脱色剂脱色，从而将分枝杆菌与其他细菌区分开。抗酸染色涂片检查简单快速，最快2~4小时即可得到报告，对于分枝杆菌感染的早诊早治具有重要意义。

分枝杆菌培养

分枝杆菌培养检查，是去除杂菌后直接培养分枝杆菌进行检测的方法。可分为罗氏培养法（固体培养法）与分枝杆菌生长指示管（MGIT）系统培养法（液体培养法）。分枝杆菌培养检查是结核病诊断的金标准，在结核病诊断、菌种鉴定、基因分型、药敏实验以及药物研究等方面有着不可替代的作用。

结核分枝杆菌抗原检测

结核分枝杆菌抗原检测以结核杆菌分泌蛋白MPB64为靶抗原，在结核病患者血液或其他标本中检出抗原阳性可作为病原菌存在的直接证据。该免疫方法直接针对结核菌，可避免患者免疫低下导致的假阴性结果。目前实验室应用的抗原检测以胶体金板包装，检验简单快速，临床应用广泛。

酶联免疫吸附试验（ELISA）

酶联免疫吸附试验（ELISA）主要检测病人血清中的结核特异性抗体。ELISA试验阳性提示患者可能存在活动性的结核感染，但应注意到结核病患者的免疫能力较低，易造成检测结果假阴性导致病例漏检，且由于抗体检测与其他分枝杆菌感染存在很高的交叉反应，导致抗体检测结果特异性、敏感性均较低。此方法常作为其他结核检验方法的补充。

γ-干扰素释放试验（IGRA）

γ-干扰素释放试验（IGRA）原理是机体感染结核菌后产生结核菌抗原致敏的效应T细胞，致敏效应T细胞在体外再次受到相同抗原刺激后分泌大量的γ干扰素，通过检测γ干扰素判断结核感染情况。IGRA试验特异度与灵敏度均较高，试验快速简便，可作为是否存在结核感染的参考，但不能区分结核潜伏感染和活动性结核病，阴性结果可作为排除结核感染的参考。

受限于免疫学检验的原理以及传染性疾病的诊断标准，结核感染的免疫学检验仅适用于是否感染结核菌的鉴别，对于具体的发病情况无法单独依据免疫学结果给出判断。由于病原学检查出结果时间较长，结核的免疫学检验仍然在结核病的诊疗中发挥重要作用。

核酸扩增试验（nucleic acid amplification tests, NAAT）

通常称PCR实验，以PCR扩增为原理基础，设计针对分枝杆菌核酸的引物。该方法主要用于检测送检标本中是否存在结核分枝杆菌核酸。因方法学原因，PCR实验具有较高的特异性，但不同的PCR方法敏感性差异很大，对送检标本的质量要求较高。对抗酸染色阴性的标本检出率也较低。

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal am-plification, LAMP）技术

LAMP技术原理是用荧光标记产生足够量的核酸，仅用肉眼观察或浊度仪检测即能判断扩增情况。该技术为恒温条件，不需要DNA纯化过程，高效特异，对环境要求低，适合基层单位的普及。其缺点也和实时荧光PCE类似，对涂片阴性的标本检出率较低，若产生非特异扩增也将干扰结果的判断。

分子线性探针技术(LPA)

LPA技术基于PCR原理，将PCR扩增、反向杂交和膜显色技术合为一体。使用经生物素标记的引物对目的基因进行扩增, 再将扩增产物与特异性探针杂交, 经酶显色法判定杂交产物结果对结核菌的检测。该方法不需要复杂的实验设备，可直接对涂片阴性但PCR阳性标本进行检测。LPA可对结核菌进行耐药性检测, 具有较高的特异性与准确率，已得到WHO认可与推荐。

Xpert MTB/RIF技术

Xpert MTB/RIF技术是由美国Cepheid公司研发的一款基于实时荧光定量PCR检测的快速全自动核酸扩增技术，可直接对痰、肺泡灌洗液等标本进行检测，能在2小时内从患者新鲜痰液中直接检出是否含有结核分枝杆菌及该菌是否对利福平耐药。该技术将样品处理、核酸提取、扩增、检测融为一体，从处理到检测均在封闭系统中进行，对操作者安全。与普通PCR技术相比，Xpert技术敏感性与特异性均较高，目前是诊断肺结核与耐药结核病的初始检验方法。

基因芯片

基因芯片又称DNA芯片，其原理是利用原位合成，将DNA探针固化于支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品的检测。该方法主要用于结核菌复合群的鉴定以及细菌耐药检测，快速高效，但其试剂设备昂贵，检测费用高，限制了该方法的推广。

二代基因测序技术（next-generation sequencing，NGS）

二代测序技术（next-generation sequencing，NGS），又称高通量测序，具有测序速度快、检测效率高、敏感性好、突变基因检出分辨率高等特点。在结核菌的检验中，NGS可准确检测结核菌全基因组信息。基于全基因组数据，结核菌的NGS测序可用于结核菌基因分型、耐药基因检测以及新突变位点分析等，在临床结核菌耐药分析以及结核菌的科研中具有广泛的应用前景。

核酸质谱分析

目前应用较为广泛的是飞行时间核酸质谱，主要用于结核菌菌种鉴定与细菌耐药突变检测，拥有通量高、准确度与灵敏度高、灵活性高、检测周期短、检测成本低等诸多优势，未来将得到进一步推广。

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