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作者：首都医科大学附属北京地坛医院 赵晨曦
肺炎支原体的核酸检测即分子生物学检测，包括DNA和RNA检测两大类，其优点是特异性强、敏感性高、检测速度快，样本易采集等，可用于早期诊断。
标本采集的最佳时机是使用抗菌药物之前。采集鼻、咽拭子时，使用铝制或塑料杆的藻酸钙、涤纶和聚酯拭子等，采集前用生理盐水漱口，在两侧腭弓、咽、咽后壁、扁桃体上的分泌物及上皮组织或鼻腔，稍微用力来回擦拭至少3次，以获取尽可能多的脱落上皮细胞；取毕，将拭子插入试管，塞紧管口，注明标本采集时间，立即送检。
采集痰液标本前用生理盐水漱口，自然咳出或抽吸采集，晨痰最佳，装入无菌瓶(集痰器)，立即送检。由于痰液直接来自感染部位，肺炎支原体核酸数量比咽拭子高，获取方便，是分子方法检测肺炎支原体的最佳标本。
支气管肺泡灌洗液中的肺炎支原体含量更高，用于病原学检查时，肺泡首次灌洗液优于第2次及第3次。遵守无菌操作，装入无菌瓶，立即送检。
主要有实时荧光定量PCR（Realtime fluorescence quantitative PCR，qPCR）、多重PCR和环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)三种。适用于检测鼻咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液样本中的肺炎支原体DNA。DNA检测标本送检时限为4小时，如果不能及时测定应置于2℃~8℃保存，一般建议保存时间不超过3天，-20℃可保存1~2周，长期保存应冻存于-70℃。
采用核酸释放剂快速裂解、释放经浓缩液处理的待测样本中的肺炎支原体DNA，利用针对肺炎支原体核酸保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针，配以PCR反应液等组分，在荧光定量PCR仪上，将荧光标记技术与PCR技术相结合，通过荧光信号的变化实现肺炎支原体DNA的快速检测。接收标本至报告结果时间约2~4小时。
该方法可进行分子分型，并检测耐药位点，进行定性定量分析，具有高灵敏度、高特异性，对操作者技术要求较高。
多重PCR能同时检测肺炎支原体和其他呼吸道病原菌，尤其适合用于急诊室等需要快速获取病原菌检测结果的临床场合。
由于多重PCR靶向多种病原菌，它对于单个病原菌的检测灵敏度通常会比相应的单重检测方法低。此外，多重PCR通常需要高性能仪器和设备齐全的实验室，仪器成本和测试成本都比单重检测高，并缺乏可更改的灵活性，难以普及到基层医疗单位。
是一种新型核酸扩增方法，针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换DNA聚合酶的作用下，基因模板、引物、链置换型DNA合成酶等在60℃~65℃进行恒温扩增，15~60分钟左右即可实现109～1010倍的核酸扩增，高于传统PCR检测的107 CFU/ml，特定的引物设计使扩增时间缩短1/3~1/2，使核酸提取进一步简化。
其优点是恒温扩增，扩增阶段对仪器的要求低，成本更低；视觉直观检测，不需要检测仪；反应速度快，敏感性高；用多个引物，特异性好。但其仍存在局限性，如扩增得到的目的片段长度存在明显差异、引物设计复杂、扩增产物片段相对较大且不易降解而致实验室存在潜在污染风险等。
RNA检测需要新鲜标本，采集后需使用专用保存液送检，以阻止RNA酶对RNA的降解，应在4小时内送至实验室并及时检测，如不能及时检测可置-20 ℃冷冻保存，否则容易造成假阴性，长期保存应冻存于-70 ℃。
实时荧光恒温扩增技术 (simultaneous amplification and testing，SAT)是基于RNA恒温扩增技术和实时荧光检测技术相结合的一种核酸检测方法。使用实时PCR仪器动态监测荧光信号，检测浓度为10~107 CFU/ml，高于实时PCR检测的102~107 CFU/ml，较PCR检测具有更高的敏感性和诊断价值。由于RNA随病原体死亡而降解，肺炎支原体RNA检测结果能反映其在人体内的生存情况，可用于感染初期的诊断、治疗后清除率的判断、感染转归的评价，且RNA检测结果与肺炎支原体感染严重程度相关。接收标本至报告结果时间约2~4小时。
实时荧光恒温扩增技术具有高灵敏性、高特异性、检测时间短、产物不易发生污染等优点，对操作者技术要求较高，标本在收集、储存、处理上较为严苛，标本若未及时有效处理则易产生假阴性。
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