口头讲座名称：PRP通过miR-21/PDCD4调控NF-κB活性达到抗菌抗炎促细胞增殖作用

糖尿病足（DF）是糖尿病的严重并发症之一，是导致非外伤性截肢的首要原因，每20秒钟就有一位患者因为糖尿病而截肢，85%的截肢由糖尿病足溃疡（DFU）所致。DF对患者生命安全及生活质量带来了严重的不利影响，造成巨大经济负担。多种病理机制导致DFU愈合困难，其中创面感染是加重病情和阻碍愈合的一个重要因素。DFU常见革兰阳性球菌感染，尤以金黄色葡萄球菌（S. aureus）为主，抗生素被用于控制DFU感染，但溃疡频繁再发及耐药菌株感染导致单纯使用抗生素效果不佳。

近年来，富血小板血浆（PRP）被广泛用于治疗DFU等创面，由PRP经凝血酶或钙剂激活后形成的富血小板凝胶（PRG）被证实具有良好的抗菌和促修复作用。MicroRNAs (miRNAs)是一类小分子非编码RNA，近来研究提示其与DFU创面的愈合直接相关，但具体机制尚不清楚。

由重庆大学附属中心医院（重庆市急救医疗中心）邓武权教授及其团队（李涛博士、陈兵教授和Armstrong DG教授等）在本届EASD上发表的研究（The antibacterial mechanism of PRP in an infected wound in vitro model）旨在通过体外创伤模型评估PRP的抗S. aureus活性，并揭示miR-21在PRP治疗DFU中的作用及分子机制，为防治难愈性创面提供依据和新靶点。

本研究采用美国创伤愈合学会(WHS)官方杂志Wound Repair and Regeneration报道的体外创伤模型，将人角质形成细胞（HaCaT细胞）和S. aureus在高糖环境下共培养建立体外高糖感染创伤模型，以贫血小板血浆（PPP）为对照，采用富血小板血浆（PRP），富血小板凝胶（PRG）及PRG萃取液（EPG）分别干预模型。使用平板菌落计数法检测S. aureus生长变化，使用CCK8法测定HaCaT细胞的增殖情况，评估PRP的抗S. aureus活性及对受细菌感染细胞的保护作用。采用qPCR检测细胞内microRNA-21水平变化，采用Western blot检测细胞内PDCD4蛋白和磷酸化NF-κB p65蛋白的变化，用Elisa法检测与创面愈合相关的炎症因子IL-6、IL-10、TGF-β1、TNF-α的变化情况。

结果显示，S. aureus浓度依赖性的对HaCaT细胞增殖造成抑制（图1 ↓）。

与PPP相比，PRP，RPG和EPG在24 h内均能显著抑制S. aureus的生长（P<0.01）。干预到48 h，PRP不能显著抑制细菌生长（P>0.05），而PRG和EPG能够继续显著抑制细菌生长（P<0.01）。在48 h内PRG和EPG抑菌作用相当，干预到72小时，PRG的抑菌作用强于EPG（P<0.05）（图2 ↓）。

EPG能够浓度依赖性的抑制细胞外S. aureus生长，对细胞内S. aureus也有显著抑制作用（图3 ↓）。

20%EPG能够保护受S. aureus感染的HaCaT细胞并促进其增殖（图4 ↓）。

S. aureus感染增加HaCaT细胞内PDCD4及磷酸化NF-κB p65蛋白表达，升高促炎因子IL-6、TNF-α，降低抗炎因子IL-10、TGF-β1。而EPG干预后，24h时 HaCaT细胞内miRNA-21水平显著增加，干预至48小时增加幅度更明显，同时PDCD4及磷酸化NF-κB p65蛋白水平下调，IL-6、TNF-α水平减少和IL-10、TGF-β1水平增加。（图5、图6 ↓）

图5 ↓

图6  ↓

研究结果提示PRP经凝血酶和钙剂激活后形成的PRG能够更长时间发挥抗S. aureus作用适用于临床，而EPG作为液体形式使用方便、精确，更适合实验室研究。miRNA-21可能通过PDCD4调控NF-κB活性，进而影响与创面愈合相关的抗炎/促炎因子表达，从而在PRP治疗DFU中发挥抗炎促愈和作用，提示miRNA-21可能是DFU修复中炎症调控的重要靶点。