侵袭性念珠菌病的病原学诊断方法包括真菌直接镜检(含荧光染色)、真菌培养及鉴定、体外药敏试验、血清学、分子生物学和组织病理检测。由于念珠菌可以侵袭人体各组织、器官，故用于检测的标本来源包括血液、无菌体液、组织、痰液、尿液、粪便、分泌物或脓液等，应尽可能按照要求规范留取并送检合格的病原学检测标本。

1．直接镜检：

可直接镜检的标本包括无菌体液、痰液、尿液、粪便、分泌物或脓液和活检组织等。查见卵圆形芽孢或孢子、假菌丝或菌丝往往提示念珠菌，而真菌荧光染色可以提高检测阳性率，目前已广泛应用于临床(中等级，强推荐)。标本直接镜检阳性对于无菌体液和组织标本具有诊断意义，但确定菌种还需结合培养结果，直接镜检阴性不能完全除外念珠菌病。

2．真菌培养与鉴定：

由于念珠菌为人体开放腔道如口腔或胃肠道的常居菌，所以从痰或粪便标本中分离培养出的念珠菌不能作为确诊依据。来源于无菌体液标本如血液、脑脊液、腹水、胸腔积液、关节腔积液等培养阳性，或活检组织标本培养阳性且伴有组织侵袭证据，可作为侵袭性念珠菌病诊断的金标准(高等级，强推荐)。对于非无菌标本，同一部位多次培养阳性或多个部位同时分离到同一种念珠菌，也常提示有侵袭性念珠菌病可能。对所有疑诊侵袭性念珠菌病的患者均应做血液真菌培养，以提高培养阳性率(中等级，强推荐)。培养阳性分离菌株可采用念珠菌显色琼脂、手工或全自动微生物鉴定试剂盒进行菌种鉴定，通过对特定DNA片段进行测序是菌种鉴定的金标准。同时还可以发现少见菌和新菌种。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)通过将待测菌株的蛋白质谱图与数据库中已知真菌的参考谱图比对后可得出鉴定结果，耗时短(3～5 min)、成本低、通量高、准确性高(中等级，强推荐)。该方法还被尝试用于部分耐药菌菌株快速测定，但其标准操作程序有待大规模的临床评估。

3．念珠菌体外药敏试验：

念珠菌属抗真菌药物体外敏感试验的标准参考方法为肉汤稀释法，且应使用人工合成的培养基(如RPMI 1640)。临床折点(clinical breakpoints)是结合微生物学特征、药代动力学/药效学(pharmacokinetics/pharmacodynamics，PK/PD)参数和临床预后数据共同确定的。临床微生物实验室技术人员进行念珠菌属药敏试验时，建议参照美国临床与实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)的抗菌药物敏感性试验执行标准CLSI M27(2017版)推荐的方法和流程，临床折点和流行病学界值(epidemiological cut-off value，ECV)参照CLSI M59(2018版)、M60(2017版)文件(表1)(中等级，强推荐)。对于念珠菌等酵母菌，部分商品化体外药物敏感检测试剂与微量肉汤稀释法的一致性较好，可以在临床工作中替代微量肉汤稀释法(中等级，强推荐)。抗真菌药物敏感性试验通常适用于以下特定情况：①作为周期性调查内容，以建立抗真菌药物对个体医疗机构内分离致病菌的抗菌谱；②协助处理难治性念珠菌病，特别是应用抗真菌药物常规剂量治疗失败时；③处理侵袭性念珠菌病，特别是唑类抗真菌药物或其他类别药物的有效性不确定时。但近年来更多学者建议，临床应常规开展唑类药敏试验(低等级，强推荐)，而棘白菌素类药敏试验主要用于近期有棘白菌素暴露史者，或者是光滑念珠菌、耳念珠菌感染者，或抗真菌治疗超过1周仍能分离到念珠菌者(低等级，强推荐)。

4．血清学检测方法：

目前，国内外应用最广泛的是血清真菌特异性细胞壁成分(1，3)-β-D-葡聚糖检测(以下简称真菌G试验)。感染早期即可阳性，且阴性预测值较高(中等级，中等推荐)。该方法主要用于检测空腹血清，也有用于检测支气管肺泡灌洗液、脑脊液标本。但真菌G试验并非念珠菌病的特异性诊断标志，曲霉、肺孢子菌等真菌感染也可阳性，其他含有葡聚糖因素(如血液滤过、腹膜透析、手术纱布)，以及溶血、黄疸患者，使用丙种球蛋白，甚至某些细菌感染也会导致其假阳性。其同样也存在假阴性。念珠菌甘露聚糖抗原/抗体检测新近已获得国家市场监督管理总局批准用于临床，白念珠菌芽管抗体检测、烯醇酶抗原检测等目前尚未常规用于临床。

5．分子生物学检测方法：

目前已在临床开展者主要为病原体宏基因组学检测技术，又称二代测序技术(metagenomic next generation sequence，mNGS)，该技术不需要培养即可直接检测临床标本，尤其是对一些病因不明的感染或已使用抗感染药物治疗后，仍有一定检测阳性率，为疑难、少见感染病的病原学诊断提供依据，但其结果解释和诊断价值评估需结合临床谨慎进行。

6．组织病理检查：

感染病灶的组织穿刺、活组织检查对一些疑难病例的诊断非常重要，如肺组织、肝组织、骨组织、脑组织等。标本应分别送病原学检查[新鲜组织标本送临床微生物室，行病原学培养和(或)mNGS]和病理学检查[送病理科常规H-E染色和过碘酸希夫(periodic acid Schiff，PAS)、六胺银染色]。若组织病理切片中查见念珠菌芽孢和假菌丝或真菌丝，且有组织侵袭证据即可确诊(高等级，强推荐)，若活检组织培养阳性则对病原学诊断和药物敏感检测意义重大(中等级，强推荐)。

本文节选自《中国成人念珠菌病诊断与治疗专家共识》